Pada fotosintesis terdapat dua tahapan, yaitu reaksi terang dan reaksi gelap. Reaksi gelap terjadi melalui tiga fase, yaitu fiksasi karbon, reduksi, dan regenerasi RuBP. Pada proses fiksasi karbon, terjadi pengikatan CO2 oleh molekul organik bisfosfat atau RuBP (gula berkarbon 5) dengan katalisator enzim rubisko (RuBP karboksilase) yang banyak ditemukan dalam kloroplas. Fiksasi karbon oleh RuBP akan menghasilkan zat intermediet berkarbon 6 yang segera terurai menjadi molekul 3-fosfogliserat (PGA). Pada tahap akhir reaksi gelap, RuBP akan tersusun kembali.
Jadi, fiksasi karbon selama proses fotosintesis dilakukan oleh bisfosfat atau RuBP.